Descrizione del progetto

Il progetto PoC si concentra su una nuova tecnica standardizzata di micro-estrazione proteica, altamente efficiente e applicabile a diversi campi, con particolare rilevanza per la diagnostica umana. Il protocollo in questione consente di estrarre e identificare le proteine target, senza alterarne completamente la struttura, a partire da piccole quantità di materiale biologico. La tecnica è efficace indipendentemente dall'origine del materiale e dalle condizioni di conservazione, evitando l'uso di metodi fisici o chimici distruttivi.

 

Utilizzando solo 2-3 mg di tessuto, è possibile ottenere proteine quasi native da campioni fissati in formalina ed inclusi in paraffina, aprendo nuove opportunità per lo studio di modificazioni post-traduzionali (come il folding, le interazioni molecolari, glicosilazione, idrossilazione, fosforilazione, proteolisi e modificazioni lipidiche) e per l'analisi delle interazioni proteina-proteina nel tessuto.

 

L'impiego di questa tecnica permette l'estrazione efficace anche delle proteine patologiche depositate negli organi, richiedendo una quantità inferiore di materiale biologico rispetto alle tecniche tradizionali. Un ulteriore vantaggio di questo nuovo approccio tecnico riguarda l'estratto, che risulta compatibile con le analisi di spettrometria di massa senza la necessità di modifiche nel buffer di soluzione, ed è adatto sia per l'approccio "bottom-up" che "top-down".

 

Lo scopo finale è l'applicazione di questa nuova tecnica estrattiva in ambito diagnostico.

 

I principali obiettivi di questo progetto sono:

 

1. Aumentare il Technology Readiness Level (TRL) dell'invenzione oggetto del brevetto, portandolo da TRL4 a TRL5, confermando la validazione dell'invenzione in un ambiente rilevante.
2. Valutare la performance qualitativa e quantitativa dell'invenzione su diversi tipi di tessuto.
3. Verificare l'efficacia e la validità dell'invenzione in ambito laboratoristico attraverso test e analisi approfondite, quali la spettrometria di massa.

 

 Risultati attesi:

 

Con questo progetto ci si propone:

• di convalidare la capacità del sistema di estrazione dell'invenzione dimostrando l’efficienza e l’affidabilità della tecnica.
• di determinare un valore di riferimento o un cut-off per la rilevazione di proteine patologiche attraverso un'analisi semiquantitativa del campione, confrontata con standard sintetici, tramite SDS-PAGE e Western Blot.
• di dimostrare l'applicabilità della nuova tecnica di estrazione per l'analisi e la definizione del proteoma associato anche a patologie renali.